斑马鱼模型评价多种上市抗肿瘤药敏结果正式发表

环特生物斑马鱼肿瘤移植模型药敏测试结果在2017年11月的《中国比较医学杂志》上发表。

本次研究分别建立了斑马鱼人肺癌 、胃癌和肝癌细胞移植模型，然后用上述模型分别评价了多种上市抗肿瘤药物的敏感性，包括贝伐单抗、顺铂、长春瑞滨、 恩度、紫杉醇、羟基脲、５⁃ＦＵ、伊立替康、吉西他滨等。

结果证实，这些药物在斑马鱼体内不仅都体现出了良好的抗肿瘤效果，而且结果与临床用药基本一致。

实验方法

1　细胞培养及标记

人肺癌A549细胞株、胃癌SGC-7901细胞株和肝癌HepG2细胞株均从美国ATCC购买，均使用含10%胎牛血清的DMEM完全培养基，在37℃恒温培养箱中培养，CO2浓度为5%。肿瘤细胞培养至对数生长期，用胰酶消化收集细胞，使用CM-Dil进行标记。

２　斑马鱼肿瘤异种移植模型的建立

将标记好的细胞进行细胞计数，调整浓度为3 × 107个细胞/mL，使用显微注射仪将细胞注射至2 dpf斑马鱼卵黄囊内，注射体积10 nL，每尾斑马鱼约注射300个细胞。注射细胞后的斑马鱼放置35℃恒温生化培养箱培养，24 h后在荧光显微镜下筛选荧光量一致的斑马鱼，按实验设计进行分组，每组30尾斑马鱼。

３　药物处理

根据临床用药相对应的方式，临床口服药物对应斑马鱼水溶给药，临床静脉注射药物对应斑马鱼静脉注射给药。通过浓度摸索实验，得到各抗癌药物在斑马鱼上的最大耐受剂量（maximum tolerated dose，MTD）或浓度（maximum tolerated concentration，MTC）。在体内药敏试验中，各药物均选择3个剂量或浓度进行实验，分别为MTD/4、MTD/2和MTD，MTC/4、MTC/2和MTC。

抗非小细胞肺癌A549细胞药敏试验组别和剂量设置见表1。抗胃癌SGC-7901细胞药敏试验组别和剂量设置见表2。抗肝癌HepG2细胞药敏试验组别和剂量设置见表3。移植肿瘤的斑马鱼，不加任何药物处理的为模型对照组。

４　荧光拍照及数据采集

抗癌药物处理至5dpf时，每个实验组随机选择10尾斑马鱼在荧光显微镜下进行观察、拍照并保存图片。利用尼康NIS-ElementsD 3.10高级图像处理软件进行图像分析，计算癌细胞相对荧光强度总和（S），定量评价各抗癌药物对斑马鱼体内肿瘤生长的抑制作用。

注：图中红色为CM-Dil标记的肿瘤细胞，红色荧光越多，表示肿瘤细胞数量越多。

结果发现

抗肺癌A549药效从高到低的药物分别为贝伐单抗（65%）>顺铂（55%）>长春瑞滨（40%）>恩度（39%）>紫杉醇（27%）。

抗胃癌SGC-7901药效从高到低的药物分别为羟基脲（46%）>5-FU（31%）=伊立替康（31%）>紫杉醇（26%）>顺铂（24%）。

抗肝癌HepG2药效从高到低的药物分别为顺铂（64%）>羟基脲（56%）>吉西他滨（46%）>阿霉素（45%）> 5-FU（38%）。

结果证实，这些药物在斑马鱼体内不仅都体现出了良好的抗肿瘤效果，而且结果与临床用药基本一致。 

这提示我们，斑马鱼肿瘤异种移植模型是一类可靠的、灵敏的、能够在体内测定药物抗癌效用的动物模型。